伯乐bio-rad转印槽的使用方法步骤

　　全程请戴手套操作，以免污染伯乐bio-rad转印槽！

　　1）电泳后SDS-PAGE 胶片浸在转印缓冲液中，洗2~3 次，每次10min.

　　2）取出伯乐bio-rad转印槽，先小心放一搅拌子在底部，再倒一半转印缓冲液。

　　3）取转印纸切成约如胶片大小，先在方形培养皿中以少许甲醇浸湿数秒钟，再置入伯乐bio-rad转印槽中的缓冲液10 min 后使用。 另取两张滤纸，以及两片方形海绵垫，都放在伯乐转印槽的缓冲液中备用。

　　4）取出转印夹打开平放，先垫一张方形海棉垫，铺上一张湿滤纸，小心平铺SDS-PAGE胶上去，然后小心迭上已润湿的转印纸，用涂菌玻璃棒赶出气泡；转印纸再滴上数滴缓冲液后，加盖一层滤纸，及另一张海绵，也都不可陷入气泡，即可把整个转印三明治卡夹装好。

　　胶迭到转印纸时，一次成功，不要重作，否则蛋白质色带可能会印上去，产生重迭影像。

　　5）将转印三明治置入已经放有一半转印缓冲液的伯乐bio-rad转印槽中，注意有转印纸的那一面向正极（红色），胶片那面向负极（黑色）。

　　6）当三明治都放入伯乐bio-rad转印槽后，以转印缓冲液盖满所有的三明治，小心动一动卡夹，除去附在卡夹内外的气泡，盖上盖子，放到一搅拌器上，打开搅拌器开始搅拌，同时接好电源，装置完成后放置10 min.

　　7）以300mA开始转印，温度会渐渐上升，转印1.5 h左右 后中止转印，取出转印三明治，打开后依次取出转印纸及胶。

　　具体转印条件要根据蛋白的大小进行优化，注意低温。

　　8）转印后的胶片可以继续进行染色，看有无蛋白质残留。若电泳时加有蓝色标准蛋白质marker（SeeBlue），则可在转印纸上看到蓝色的色带，确定转印成功，并可评估转印效率。