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大鼠 白细胞介素-6(IL-6)ELISA 检测试剂盒 说明书

发表时间:2010-11-16  |  点击率:1808

详细介绍:

 大鼠 (Rat) 白细胞介素-6IL-6ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用  标本:细胞培养上清液

试验原理:
IL-6
试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA.已知IL-6浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-6和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物AB,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-6的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制
试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48
人份酶标板 1块板(96T 半块板(48T 即用型
塑料膜板盖 1 半块 即用型
标准品:800pg/ml 1瓶(0.6ml 1瓶(0.3ml 按说明书进行稀稀
空白对照 1瓶(1.0ml 1瓶(0.5ml 即用型
标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml 1瓶(2.5ml 即用型
生物素标记的抗IL-6抗体 1瓶(6ml 1瓶(3.0ml 即用型
亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml 1瓶(5.0ml 即用型
洗涤缓冲液 1瓶(20ml 1瓶(10ml 按说明书进行稀释
底物A 1瓶(6.0ml 1瓶(3.0ml 即用型
底物B 1瓶(6.0ml 1瓶(3.0ml 即用型
终止液 1瓶(6.0ml 1瓶(3.0ml 即用型

自备材料
1
 蒸馏水。
2
 加样器:5ul10ul50ul100ul200500ul1000ul
3
 振荡器及磁力搅拌器等。

安全性
1
 避免直接接触终止液和底物AB。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2
 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3
 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项
1
 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2
 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3
 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4
 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物AB液时,避免使用带金属部分的加样器。
5
 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6
 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7
 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8
 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9
 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法
1
 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2
 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3
 细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4
 保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

试剂的准备
1
 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:
800 pg/ml 
6号标准品) 原倍浓度不用稀释直接加入50ul
400 pg/ml 
5号标准品) 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
200 pg/ml 
4号标准品) 100ul5号标准品加入100ul的标准品稀释液
100 pg/ml 
3号标准品) 100ul4号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 pg/ml 
2号标准品) 100ul3号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 pg/ml 
1号标准品) 100ul2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 pg/ml 
(空白对照) 原始浓度不用稀释直接加入50ul

2 洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。

操作步骤
1
 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2
 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3
 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4
 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。

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