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从土壤中轻松获取高质量RNA
点击次数:1280 发布时间:2010-11-16 打印本页面 返回

 

详细介绍:
从土壤中轻松获取高质量RNA
众所周知,从土壤中提取DNA已非易事,而想从中再提取RNA可说是难上加难。DNA不容易提取是因为本身土壤中富集的材料就少,提取过程相对复杂,造成操作损失;而RNA不容易提取除了以上所提到的原因外,还有一个很关键的原因——无处不在的RNA酶,对RNA的稳定存在构成极大威胁。另外还有一点就是土壤中某些物质的微量残留都会影响到科研人员后期PCR反应。这就是目前国际国内市场中土壤RNA提取产品不多的原因。
    因此要想对土壤RNA有较好的提取效果,我们就必须知己知彼,既要对研究对象(土壤)熟知,又要对研究工具(试剂盒)熟悉。
土壤中重要物质腐殖质
土壤除了为陆生植物提供营养源和水分之外,还是植物生长,进行光合作用、能量交换的主要场所;同时也具有微生物生长繁殖所需要的一切营养物质及各种条件,是微生物良好的生活场所,有“微生物的天然培养基”之称。因此土壤是一种重要的环境要素。
简单说,土壤是由固相(矿物质、有机质)、液相(土壤水分或溶液)和气相(土壤空气)三相物质四种成分有机地组成。而所有这些组成在土壤微生物的存在下却能形成一种对作物生长有利,对科研人员非常不利的物质——腐殖质。污泥中也不例外,同样有腐植酸和富里酸存在。
腐殖质是由一些异养的微生物,如某些腐生细菌,把土壤中的动、植物残体和有机肥料分解,与矿物质颗粒紧密结合在一起而形成的一种黑色的胶状物质,是土壤有机质的主要类型,一般占土壤有机质总量的85—90%以上。腐殖质既含有氮、磷、 钾、疏、钙等大量元素,还有微量元素;另外在分解过程中还会产生腐殖酸、有机酸、维生素及一些激素等。在水体中,腐殖质主要指腐殖酸和富里酸。实验证明,微量腐殖酸或富里酸的存在就会导致PCR的失败!这在众多公司的提取试剂盒中都有相应说明。
再加上近期土壤污染(肥料、农药等)的存在,因此导致提取对象成份非常复杂,提取难度也就可想而知。有的公司产品即使有少量的RNA提出,也会造成科研人员后期的实验不顺畅,这样的例子已司空见惯。因此解决从土壤提取RNA后腐殖质残留以及其它影响成分的有效去除成了各家公司关注的焦点。
土壤RNA提取试剂盒
目前市场上常见的试剂盒大概有3-4中,这些试剂盒又通常采用玻璃珠(钢珠)破碎的方法,然后用玻璃奶和吸附柱反复漂洗去除杂质和腐殖酸,操作过程极其复杂,一般需要2.5小时以上的操作时间。使用,可能会因为步骤不熟练,超过4个小时。并且有些操作在常温进行,这就很难对RNA进行有效保护,结果可能会导致即使有RNA的提出,也不再是完整的RNA片段,造成部分或全部降解。
因此,提取过程耗时短,影响物质(腐殖质等)去除干净,提取过程RNA稳定才是从土壤中轻松获取高质量RNA的必要条件。针对这一目标,百泰克公司经过多年的不断探索,集众家所长,终于开发了一款非常方便简单快捷的提取土壤(污泥)中RNA的试剂盒,该试剂盒具有以下特点:
l  操作简便 
整个过程,操作时间仅需1小时,熟练时,能更快,避免操作时间过长RNA降解
l  破碎方法优良 
采用常见的液氮研磨,既能使RNA处于低温的保护状态,不容易降解,又不需要特殊的设备,降低实验成本。同时还可避免玻璃珠破碎过于剧烈导致的片段机械损伤。另外,玻璃珠破碎一般需要专用仪器,有些试剂盒不买专用仪器没法使用,而一般的涡旋也很难取得好的破碎效果。
l  新型腐殖酸去除技术 
采用创新的腐殖酸去除技术,短时间内就可达到很好的去除效果
l  不需单独去除DNA 
操作过程中已经去除DNA,不需另外单加DNA酶再去除DNA的步骤,省时省力。
 
 
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