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ABA ELISA试剂盒用于植物提取液ABA

发表时间:2010-11-16  |  点击率:2695

 

详细介绍:
用 途
ABA ELISA试剂盒用于植物提取液ABA 。本试剂盒可以检测天然和重组的ABA 。
本试剂盒于科研、而非用于临床诊断。
试验原理
ABA 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知ABA 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ABA 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ABA 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制

试剂盒成份(2-8保存)
96孔配置
48孔配置
配制
96/48人份酶标板
1块板(96T)
半块板(48T)
即用型
塑料膜板盖
1块
半块
即用型
标准品:40nmol/L
1瓶(0.6ml)
1瓶(0.3ml)
按说明书进行稀稀
空白对照
1瓶(1.0ml)
1瓶(0.5ml)
即用型
标准品稀释缓冲液
1瓶(5ml)
1瓶(2.5ml)
即用型
生物素标记的抗ABA抗体
1瓶(6ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
亲和链酶素-HRP
1瓶(10ml)
1瓶(5.0ml)
即用型
洗涤缓冲液
1瓶(60ml)
1瓶(30ml)
按说明书进行稀释
底物A
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
底物B
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即用型
终止液
1瓶(6.0ml)
1瓶(3.0ml)
即用型

自备材料
1. 蒸馏水。
2. 加样器:5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3. 振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1. 此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性,但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病,依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
3. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
4. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
试剂的准备
1. 标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行:

40 nmol/L
(6号标准品)
原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
20 nmol/L
(5号标准品)
100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
10 nmol/L
(4号标准品)
100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
5.0 nmol/L
(3号标准品)
100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
2.5 nmol/L
(2号标准品)
100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
1.25 nmol/L
(1号标准品)
100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 nmol/L
(空白对照)
原始浓度不用稀释直接加入50ul。

2. 洗涤缓冲液(20×)的稀释:蒸馏水20倍稀释。
操作步骤
1. 使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5. 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6. 甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作四次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育15分钟。避免光照。
8. 取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。
建议使用的实验方案

 
标准品浓度(nmol/L)
 
A
40
40
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
B
20
20
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
C
10
10
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
D
5.0
5.0
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
E
2.5
2.5
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
F
1.25
1.25
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
G
0
0
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
H
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品
样品

结果分析
以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的ABA 标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的ABA 含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
局限
6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到的结果。
试剂盒性能
1. 灵敏度:zui小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性:不与人其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
 
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